高天佐，孙娜娜，宋姗姗，赵成龙，张玉杰，段坦然，鄂伟，杨雪
（青岛易邦生物工程有限公司动物基因国家重点实验室 山东青岛 266041）
1.1 分类及形态
禽脑脊髓炎病毒（AEV）属于细小核糖核酸病毒科，肠道病毒属，无囊膜，病毒粒子直径为20～30nm，呈球形，该病毒只有一个血清型。
1.2 生物学特征
不同分离株属于同一血清型，但可根据对组织的侵蚀性不同，分为嗜肠型和嗜神经型，嗜肠型以自然野毒株为代表，通过口腔感染鸡，并在粪便中传播；
嗜神经型以胚适应株为代表，口腔一般不引起发病，通过脑内接种可引起严重的神经症状。
2.1 AEV 发病历史回顾
1932 年美国首先报道此病，其后开始在非洲、亚洲、澳大利亚、欧洲以及北美和南美蔓延；
近年来，在伊朗、日本、巴西、韩国、希腊等国家时有发病的报道。
在我国，1980 年曾有疑似发病的报道；
1982 年通过病理组织学方法，作出了此病的诊疗报告；
1983 年通过流行病学调查、病理组织学的研究和人工发病等试验，确诊了此病，进一步证实AEV在我国的存在。此后，广西、江苏、福建、上海、山东、内蒙古、黑龙江、河北、河南、江西、湖北等全国大多数商业化养禽地区都有此病的报道[1]。
2.2 近年流行规律及发病特点
1）本病季节性不明显，一年四季均可发生，鸡、野鸡、鹌鹑、火鸡和鸽子均可感染本病，鸡对本病最易感，产蛋鸡主要表现一过性产蛋下降现象，本病既可垂直传播，也可通过消化道等水平传播，种鸡产蛋期间感染后4 周内所产的种蛋带有病毒，少部分感染的胚蛋在孵化后期死亡，大部分感染的鸡胚可以孵化出壳，但出壳的雏鸡在出壳后陆续出现典型的发病症状，随着种鸡感染后期抗体的产生与稳定，蛋传现象随之逐渐降低甚至消失[2]。
2）以往的认知中，AEV 在育成阶段可感染并不表现临床症状，但近年国内许多养殖场免疫多在用进口AEV 活疫苗，1～4 周左右的鸡群不断出现消瘦、瘫痪和头颈震颤、翅膀下垂等鸡只，且可持续长达一个月以上，发病率在1%～10%不等，大群正常，个别案例病程持续时间长，有的甚至持续到开产后，给养殖企业造成巨大损失，也是近期AE 发病的主要原因。
截至目前统计该现象明显呈上升趋势，发病时间（图1，图2）没有明显规律性，发病群间（图3）主要为蛋鸡系列（蛋鸡、蛋种鸡）其次为肉种鸡，北方地区蛋用型鸡群饲养较多，发病也较为突出（图4），发病日龄（图5）多集中在90～120 日龄。
图1 2021 年发病时间分布
图2 1～8 月发病时间分布（2021-2022 年）
图3 发病群间分布
图4 发病空间分布
图5 发病日龄分布
4.1 案例
案例1：2020 年山东烟台某蛋鸡养殖公司，50 日龄免疫进口A 公司AEV 活疫苗，70 日龄左右均出现不同程度瘫痪现象，主要表现侧瘫（如图6，图7），比例可高达10%左右，开产后未发现新增。
图6 瘫痪、侧瘫
图7 瘫痪、侧瘫
案例2：2021 年山东德州某90 日龄蛋种鸡群免疫进口B 公司AEV 活疫苗，两周后出现瘫痪。同一个场3 个鸡舍110 日龄时都发现明显瘫痪，比例约在0.5%。
案例3：2022 年山西某肉种鸡养殖公司，90 日龄免疫AEV 活疫苗，免后20 d 左右陆续出现瘫鸡（如图8-图10）
图8 山西肉种鸡侧瘫
图9 山西肉种鸡瘫痪
图10 山西肉种鸡瘫痪、侧瘫
案例4：2022 年吉林省某肉种鸡养殖公司，2.4 万套，51 日龄AEV活疫苗免疫，67 日龄常规免疫时发现瘫痪（如图11，图12）；
6 栋鸡舍，均出现，公鸡少（肉种公鸡饲养量多明显低于母鸡），母鸡多，26 d 时间合计淘汰1.5%。
图11 病鸡瘫痪
图12 病鸡侧瘫
4.2 病原检测
1）荧光PCR。通过荧光PCR 检测，如图13 中出现一条明显的扩增线为滑液囊支原体（MS）阳性对照，检测样本均未出现明显的扩增曲线。
图13 荧光PCR 结果
2）RT-PCR/PCR 结果。送检样本通过RT-PCR/PCR 检测到AEV 目的性基因条带并送测序公司测序；
均未检测到病毒性关节炎与滑液囊支原体目的性基因条带，图14 为常规检测样本PTPCR/PCR 电泳结果，其中上数第2 排第6-10 样本（图15 为结果放大后图片），检测样本分别为送检样本1、送检样本2、送检样本1、mark（2 000bp）、送检样本2，其中6、7 为短引物（285bp 扩增性广，国内流行脑炎毒株外还可检测日本脑炎），8、10 为AEV 长引物（1 600bp 针对性强）。
图14 常规检测电泳图
图15 结果放大后图片
3）测序结果。通过RT-PCR 检测对送检样本进行鉴定后送基因公司进行测序比对发现，AEV 活疫苗免疫后出现瘫痪、侧瘫情况多与疫苗关键位点突变有关，选择部分发病群体使用的AEV 活疫苗进行测序比对，发现均在1408 位发生突变且存在毒力增强风险，与这部分鸡群病鸡脑组织中分离的AEV 毒株在VP2、VP3 核苷酸序列上同源性分别为99.8%、99.7%，而且在与致病力相关核苷酸位点1408 位均发生突变。
4）细菌分离。未分离到细菌。
5.1 AEV 传代过程中毒力的增强
参考国外相关文献（表1），疫苗毒、野毒随着传代次数增加，19日龄胚体瘫痪比率增加、胚胎死亡率增加，相比对照组，19 日龄胚体平均重量下降明显。
表1 传代过程中毒力的增强
5.2 AEV 传代过程中位点改变情况
通过整合测序结果发现，部分疫苗毒于第五代在1120 位出现A 到G 碱基变化；
野毒株此位点未出现变化；
部分疫苗株、野毒株并可于第五代在1408 位出现C 到T 碱基变化（表2）。
表2 测序结果比对
随着国内鸡群疫苗免疫意识越来越强、免疫厂家以及管理参差不齐的境况下，为了便于临床诊断，试图尽可能地通过Elisa（IDEXX）滴度值反映出鸡群中野毒与疫苗毒之间的差距，近年对送检样本检测中心收集并统计综合数据（实验室数据与送检情况相关，仅供参考），取平均值作为目前国内鸡群的参考值，鸡群抗体滴度明显高于参考值，建议结合场内、鸡群实际情况等综合因素进行分析，目前主要免疫品种为蛋（种）鸡（图16）、肉种鸡（图17）。
图16 蛋（种）鸡AE 参考值
图17 肉种鸡AE 参考值
脑炎免疫后出现明显瘫痪问题通过检测显示与毒株突变造成毒力增强有关，AEV 活疫苗的生产工艺具有较高的技术要求，建议选择工艺成熟，质量可靠的疫苗预防，并严格按照免疫剂量进行免疫；
在这里还要强调一下，也不是所有的瘫痪都是AEV 活疫苗毒力增强所致，临床中要注意与滑液囊支原体、病毒性关节炎、饲料营养吸收等疾病及管理因素做好区分；
疫苗毒可以在脑部检测到，属于正常现象，需要通过基因测序进一步分析进行区分。